SEP
SNEST
DGEST
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE CIUDAD ALTAMIRANO.
PRÁCTICA NO. 2
“PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRES”
QUE PRESENTAN:
FLOR DEL CARMEN DORANTES NAVA
ZULAI ESPINOZA AVIANEDA
LUIS ANTONIO FLORES HERNÁNDEZ
FANNY IMELDA PASTENES FELIZOLA
DEYANIRA VERGARA PÉREZ
LICENCIATURA EN BIOLOGÍA
CIUDAD
ALTAMIRANO, GRO. MÉXICO. 20 FEBRERO DEL 2012
“PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRES”
1Dorantes N.F.C.,
1Espinoza A.Z., 1Flores H.L.A., 1Pastenes F.
F. I., 1 Vergara P.D.
1Instituto
Tecnológico de Cd. Altamirano
RESUMEN
El presente trabajo se llevó a
cabo en el laboratorio de microbiología del tecnológico de Cd. Altamirano,
teniendo como objetivos conocer los diferentes componentes del medio de cultivo
y su naturaleza química y bioquímica, así como manejar las técnicas básicas a
través del uso adecuado de reactivos y por último comprender la importancia
nutricional de los componentes de los medios de cultivo. Para ello fue
necesario realizar los cálculos de los sulfatos, se prosiguió a pesar cada una
de las sustancias en la balanza analítica, posteriormente se agregaron cada una
de éstas a un vaso de precipitado con 100ml de agua destilada, disolviendo
hasta formar una solución homogénea, a continuación se aforó la solución a
200ml; por último se vació a un botella color ámbar y se guardó ésta en el
refrigerador.
Palabras claves: soluciones
stock, reactivos, sulfatos, balanza analítica.
ABSTRACT
This work was carried out in the microbiology
laboratory of Ciudad Altamirano technology, with the objective to know the
different components of culture medium and the nature of chemistry and
biochemistry, and manage the basic techniques through proper use of reagents
and finally understand the nutritional components of the culture media. This
involved the calculations of sulfates, was continued despite each of the
substances on the analytical balance, then added each of them to a beaker with
100 ml distilled water, dissolving to form a homogeneous solution, then the
solution was decanted to 200ml and finally emptied an amber bottle and stored
it in the refrigerator.
Keywords: stock solutions, reagents, sulfates, analytical balance
I. ANTECEDENTES
Son muchos los componentes de un medio para
cultivar material vegetal "in vitro": por ejemplo, se encuentran las
sales minerales que incluyan todos los elementos esenciales tanto micro como
macronutrientes, las vitaminas tales como riboflavina, tiamina, piridoxina,
ácido nicotínico, ácido pantoténico, biotina, y ácido fólico. Aminoácidos tales
como L-glutamina, asparragina y cisteína, los hexitoles como mioinositol,
hormonas y reguladores del crecimiento, una fuente de carbono y un agente
gelificante.
Un método de hacer menos tedioso el trabajo
consiste en preparar lo que se conoce como "soluciones madre" de
algunos de estos componentes. Estas soluciones tienen una concentración que
suele ser 10, 100 e incluso 1000 veces superior a la concentración final del
medio. Su ventaja no estriba sólo en el hecho de que hay que pesar menos veces
cada vez que se prepara el medio sino también la exactitud de la pesada ya que
algunos compuestos están tan diluidos en la solución final, que la pesada que
habría que hacer estaría por debajo de los límites de exactitud de las balanzas
de precisión.
Las soluciones madre se conservan en frio y en bote
color ámbar durante algunos meses, desechándose ante cualquier señal de
precipitación. Se suelen preparar soluciones madre de las sales minerales, los
aminoácidos, hormonas, vitaminas y hexitoles, mientras que la fuente de carbono
y el agente gelificante se pesan cada vez ya que se necesitan en cantidades muy
elevadas y no se conservan bien en solución. En el caso de las hormonas es mejor
preparar una solución madre de cada una de ellas y medir volúmenes determinados
y congelarlos.
Desde el punto de vista práctico la preparación de
soluciones madres o stock tiene como finalidad evitar:
1. Pesar cada uno de los
compuestos químicos que constituyen un medio de cultivo, cada vez que se
requiera elaborar, lo que implicaría evitar demasiado tiempo en su preparación.
2. Inexactitud al pesar
cantidades muy pequeñas de ciertos compuestos químicos.
Otro aspecto importante que se debe considerar es
la cantidad de agua que se utilice para disolver las sales inorgánicas que
constituyen las soluciones stock y en general el medio de cultivo.
El agua debe ser destilada o
bidestilada y necesariamente des ionizada. (Kyte & Kleyn, 1996). Se han
creados numeroso medios de cultivos (medio basal), cuyas diferencias estriban
en las cantidades y tipos de sales empleadas.
II. DEFINICIÓN DEL PROBLEMA
Para tener éxito el cultivo de tejidos vegetales es
de suma importancia colocar las soluciones en el medio de cultivo con las
concentraciones adecuadas, por esta razón es necesario que el alumno aprenda a
realizar las soluciones madre con las cantidades de soluto y solvente
requeridas en cada una de las soluciones, así como también es necesario que se
aprenda a realizar los cálculos matemáticos correspondientes a cada una
de las soluciones para el medio de cultivo.
III. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Conocer la preparación de las
soluciones stock para los medios de cultivo ms.
OBJETIVO ESPECIFICO
· Conocer los diferentes componentes del medio de cultivo y su naturaleza
Química y Bioquímica.
· Manejar las técnicas básicas a través del uso adecuado de reactivos.
· Comprender la importancia nutricional de los componentes de los medios
de cultivo.
IV. JUSTIFICACIÓN
Las plantas requieren de ciertos
nutrientes para poder crecer y desarrollarse de manera satisfactorios, de igual
manera el cultivo de tejidos in vitro, requiere de ciertas condiciones y
nutrientes para su optimo desarrollo; las soluciones stock son de gran
importancia para la preparación de los medios de cultivo de tejido ya que estas
se encuentran en concentraciones que son requeridas para los cultivos
vegetales, por esta razón es importante que el alumno conozca la forma de
prepararlas, teniendo los conocimientos adecuado para realizar los cálculos
requeridos y manejo de éstas.
V. FUNDAMENTO TEÓRICO
El cultivo de tejidos ha sido
considerado durante mucho tiempo como una mezcla de ciencia y arte. Fue considerada
inicialmente como una técnica particularmente difícil de aprender. Sin embargo,
estas dificultades de los comienzos están hoy en día prácticamente superadas
gracias a factores como la disponibilidad de antibióticos, los medios de
composición definida, las instalaciones asépticas (salas de cultivo limpias,
cabinas de flujo laminar, incubadoras estériles), dispositivos de cultivo
(botellas con tapones filtrantes, placas de Petri ventiladas; avances técnicos
y la aparición de un buen número de compañías comerciales de suministro de
medios, sueros, equipo han hecho del cultivo celular una tecnología con buena
reproducibilidad (Reina, T Merlín 2003).
El fundamento teórico del cultivo
in vitro es el concepto de la totipotencialidad celular. La totipotencia es la
capacidad que tiene una célula somática de regenerar un planta completa e igual
a la planta madre. (Radice, T. et al 1983)
Diversas plantas de interés
agroalimentario, ornamental o manipuladas genéticamente, se propagan o
regeneran vegetativamente. Asimismo, en algunos casos es preciso emplear
técnicas de propagación vegetativa para erradicar infecciones por virus, lograr
la propagación de especies en las cuales es difícil hacerlo naturalmente, y
para introducir variaciones genotípicas que aumenten la calidad de los
productos.
Con la aplicación de la técnica de micro
propagación de plantas, se amplían las perspectivas de obtención de material
vegetal con mejor calidad agronómica y en cualquier época del año (Alberti et
al. 1992). Para el desarrollo de esta técnica, deben considerarse aspectos
fundamentales, como la procedencia, selección y desinfección del explante, así
como la composición de los medios de cultivo a utilizar en cada una de las
etapas y las condiciones de crecimiento (Navarro y Perea 1996).
Uno de los mayores usos del cultivo de tejidos
es la propagación vegetativa de plantas con el fin de disponer de gran cantidad
de material vegetal fitosanitariamente sano (Pasqual y Ferreira 2007).
VI. MATERIALES Y METODOS
6.1 Identificación de los sulfatos
Los sulfatos necesarios para la preparación del
medio ms, fueron sulfato de magnesio, sulfato de manganeso, sulfato de zinc y
por último sulfato de cobre, cada uno de estos fueron extraídos del cuarto de
los reactivos.
6.2 Pesado de los sulfatos
Una vez identificado cada uno de
los sulfatos, se prosiguió a pesar en la balanza analítica 7.4g de MgSO47H2O,
.338g de MnSO44H2O, .0172g de ZnSO47H2O
y .0005g de CuSO45H2O, cada uno de ellos por separado en
una laminilla de aluminio para poder obtener un pesado exacto y preciso
6.3 Preparación de la solución
Cuando se tuvieron los solutos
pesados, posteriormente se agregaron cada una de ellas a un vaso de precipitado
con 100ml de agua destilada, moviéndolas con un agitador con el fin de obtener
una solución homogénea, se prosiguió a aforarla en una probeta graduada a
200ml; por último se vertió la solución elaborada en una botella color
ámbar y tapó con papel aluminio e introdujo al refrigerador, hasta su próxima
utilización.
VII. RESULTADOS Y DISCUSION
7.1 Informe escrito de las
actividades
Primeramente se realizó los
cálculos de la solución stock para el medio MS concentrados a 100X y a
una solución de 200ml para Sulfatos ver Fig. 1Para que una vez teniendo
los cálculos se pudieran pesar en la balanza analítica; esto se realizó de la
siguiente manera aunada a los siguientes datos:
MgSO4 7H2O
-------------------------- 0.370
MnSO4 H2O
---------------------------- 0.0169
ZnSO4 7H2O
--------------------------- 0.0086
CuSO4 SH2O
-------------------------- 0.000025
Fig.1 MgSO4, MnSO4, ZnSO4, CuSO4
7.2 Pesado de los solutos en la
balanza analítica
Una vez que se obtuvo los
resultados de los cálculos del medio ms para realizar las soluciones stock se
prosiguió a pesar cada uno de los sulfatos cuidadosamente en la balanza
analítica de forma ordenada como se muestra en las figuras, posteriormente se
agregaron al vaso de precipitado que contenía agua destilada y se diluyo, para
posteriormente agregar el medio de sulfatos a la botella ÁMBAR. Ver Fig. 2.
Figura 2: pesado de los solutos
VIII. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
7.1 Conclusiones
Se logró preparar una solución
sulfatos de 200ml a con una concentración de 100X exitosamente, aunque debido a
las malas especificaciones del profesor no se logró realizar la solución la
primera vez, sino que esta se realizó exitosamente en la segunda ocasión. Una
vez tenida la solución de sulfatos con la concentración correspondiente,
se puso en una botella de vidrio y se guardó en el refrigerador a una
temperatura de 4°C aproximadamente.
Con esta práctica se logró que el alumno aprendiera
a preparar las soluciones madre, también se aprendieron a realizar los cálculos
matemáticos necesarios para preparar la solución, así como la importancia que
tienen cada uno de los componentes en el medio de cultivo y lo que ocasiona si
nuestra solución no está concentrada en los parámetros establecidos para el
cultivo de tejidos vegetales, esto es de suma importancia ya que de esto va a
depender si nuestro tejido vegetal se desarrolle en nuestro medio in vitro.
7.2 Recomendaciones
Se recomienda que revisar varias veces
los cálculos matemáticos de las concentraciones de cada uno de los componentes
de los medios de cultivo ya que un error en el cálculo de alguno de los
sulfatos cambia en gran medida la concentración de nuestra solución, también se
recomienda que el profesor especifique bien las sustancias que se agregaran en
cada uno de los compuestos así también se recomienda a los alumnos llevar acabo
todos pasos necesarios y revisar el formato de la práctica, pedir ayuda al
profesor en caso de tener una duda en alguno de los pasos que se especifican en
la práctica, de igual forma se recomienda que se pesen exactamente cantidades
adecuadas de cada uno de los sulfatos, es importante que los sulfatos se
diluyan bien para después aforarlos en la concentración de agua destilada
correspondiente.
IX. BIBLIOGRAFIA
- Gamborg, O.L., T. Murashige,
T.A. Thorpe y I.K. Vasil. 1976.
Plant Tissue Culture Media. In Vitro 12(7): 473-478.
- Ozias-Akins, P. y I.K.
Vasil. 1985.
Nutrition of Plant Tissue Cultures. En: Cell Culture and Somatic Cell Genetics
of Plants, Ed. I.K. Vasil., V.2. pags. 129-147.
- Pierik, Ir. R.L.M. 1984. In vitro culture of Higher plants.
Department of Horticulture Agricultural University, Wageningen, 107 pags.
- Reinert, J. y Yeoman, J.J.
1982. Plant Cell and Tissue
Culture. A Laboratory Manual. Ed.Springer-Verlag, Berlín, 83 pags
- Street, H.E. y L.A. Whiters. 1974. The anatomy of embryogenesis in
culture. En: Tissue culture & Plant Science. H.E. Street (Ed.) Ed. Acad. Press, Londres, pp. 71-100.
X. ANEXOS
¿Qué es un medio de cultivo?
R= formulación químicamente
definida, donde los explantes (plantas) encuentran las condiciones para
desarrollar su potencial intrínseco.
¿Qué es una solución stock?
R= solución concentrada de
nutrientes o de fitohormonas.
¿Sustancias para preparar un
cultivo ms.?
R= Nitratos, Sulfaots, Quelatos,
Po Bo Mo, Halogenos, Organicos, A.N.A., Sacarosa, Phytagel.
